Un análisis de micotoxinas puede ser impecable y aun así estar equivocado. La razón casi nunca está en el laboratorio: está en el camino que recorre la muestra desde el campo hasta el resultado.
En este artículo recorremos ese camino etapa por etapa: cómo se forma la contaminación, por qué se concentra en puntos calientes y qué decide realmente la confiabilidad de un resultado.
de la variabilidad del resultado vino del muestreo, no del análisis, en un estudio con aflatoxinas en cacahuate. La preparación aportó 7.2 % y el análisis solo 0.1 %.
Whitaker et al., J. AOAC Int. 77(1):107–116, 1994.
En este artículo: 1 · Formación · 2 · Puntos calientes · 3 · Muestreo · 4 · Preparación · 5 · Extracción · 6 · Análisis · Video
Etapa 1 · Formación
¿Cómo se forman las micotoxinas?
Las micotoxinas son compuestos tóxicos que producen algunos hongos al colonizar el grano, en el campo o durante el almacenamiento. Los géneros más relevantes son Aspergillus, Fusarium y Penicillium.
Su formación depende del ambiente:
- Calor y sequía que estresan a la planta
- Humedad elevada (actividad de agua)
- Daño por insectos
- Almacenamiento inadecuado
Cada toxina tiene sus propias condiciones:
Fuentes: NC State Extension; Purdue Extension BP-47; APS; FAO/OMS JECFA; FSA Reino Unido; revisión T-2/HT-2 (PMC10467144).
Etapa 2 · Puntos calientes
La toxina no se reparte de forma uniforme
Dentro de un lote, la contaminación se concentra en unos pocos granos: los puntos calientes. La gran mayoría puede estar libre de toxina mientras un grupo pequeño de granos lleva casi toda la carga.
Por eso dos muestras del mismo lote pueden dar resultados muy distintos. La pregunta clave no es solo qué método usar, sino si la muestra llegó a incluir esos granos.
¿Qué implica para el control de calidad?
Un resultado aislado describe la muestra, no necesariamente el lote. Para que represente al lote, la muestra debe tomarse con un plan que aumente la probabilidad de capturar los puntos calientes.
Etapa 3 · Muestreo
¿Cómo se toma una muestra representativa?
Reglamento de Ejecución (UE) 2023/2782, que sustituye al Reglamento (CE) 401/2006.
Etapa 4 · Preparación
¿Por qué moler fino la muestra?
De la muestra agregada solo se analiza una porción pequeña. Moler fino y homogeneizar reparte la toxina en muchas partículas, de modo que cualquier submuestra se parezca más al total: entre más fina la molienda, más cerca del valor real.
¿Y para ocratoxina A?
El requisito es más fino: al menos 95 % debe pasar por una malla 30 (0.6 mm).
USDA AMS, PN-2604: New Sample Grinding Requirements for Mycotoxin Testing.
Etapa 5 · Extracción
¿Cómo se prepara el extracto?
Un flujo típico con un kit de flujo lateral para aflatoxinas, siempre a temperatura ambiente (20–25 °C):
- Agregar metanol al 70 % (o etanol al 50 %) a la muestra molida.
- Agitar vigorosamente 5 min y centrifugar 1 min a 2000 g.
- Mezclar 100 µL del sobrenadante con 200 µL de solvente: Dilución I.
- Aplicar 100 µL de la Dilución I en la tira e incubar 3 min.
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Etapa 6 · Análisis
¿Cuánto influye cada etapa en el resultado final?
La lectura se resuelve en segundos: la tira se fotografía con el smartphone y la app interpreta el resultado. Pero el análisis es la etapa que menos variabilidad aporta.
Aflatoxinas en cacahuate, lote a 100 ppb; muestra 2.27 kg, submuestra 100 g, cromatografía de líquidos. Whitaker et al., J. AOAC Int. 77(1):107–116, 1994.
Pon a prueba lo que viste
Elige tu respuesta y despliega para comprobarla.
1. ¿Qué etapa aportó más variabilidad al resultado: análisis, preparación o muestreo?
Muestreo: 92.7 % de la variabilidad en el estudio de Whitaker et al.
2. ¿Qué fracción de la muestra molida debe pasar por la malla 20: 50 %, 80 % o al menos 95 %?
Al menos 95 %, para aflatoxinas, DON, fumonisinas y zearalenona.
3. Una muestra tomada solo de la superficie del lote puede dar… ¿un falso positivo, un falso negativo o un resultado más preciso?
Un falso negativo: puede dejar fuera los puntos calientes.
Un buen resultado empieza en un buen muestreo. En LESCA acompañamos a laboratorios y plantas con kits de clase mundial para micotoxinas, desde el plan de muestreo hasta la lectura del resultado.
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Referencias
1. Whitaker TB, Dowell FE, Hagler WM Jr, Giesbrecht FG, Wu J. Variability associated with sampling, sample preparation, and chemical testing for aflatoxin in farmers' stock peanuts. J AOAC Int. 1994;77(1):107–116.
2. Reglamento de Ejecución (UE) 2023/2782 de la Comisión, métodos de muestreo y análisis para el control de micotoxinas en alimentos.
3. USDA AMS. PN-2604: New Sample Grinding Requirements for Mycotoxin Testing.
4. NC State Extension, Mycotoxins in Corn; Purdue Extension BP-47; APS, Zearalenone; FAO/OMS JECFA, Fumonisins (2001); FSA Reino Unido, Code of Good Storage Practice to Reduce Ochratoxin A in Cereals; revisión T-2 y HT-2, PMC10467144.
Del campo al resultado: el recorrido de una muestra de micotoxinas